臨床生物化學/層析技術(shù)的原理和分類

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臨床生物化學

常用分析技術(shù)在臨床生物化學中的應(yīng)用
- 層析技術(shù)的應(yīng)用
  - 層析技術(shù)的原理和分類
  - 層析法實驗技術(shù)

（一）層析技術(shù)的原理

層析法是目前廣泛應(yīng)用的一種分離技術(shù)。本世紀初俄國植物學家M.Tswett發(fā)現(xiàn)并使用這一技術(shù)證明了植物的葉子中不僅有葉綠素還含有其它色素?，F(xiàn)在層析法已成為生物化學、分子生物學及其它學科領(lǐng)域有效的分離分析工具之一。

層析法是利用不同物質(zhì)理化性質(zhì)的差異而建立起來的技術(shù)。所有的層析系統(tǒng)都由兩個相組成：一是固定相，它或者是固體物質(zhì)或者是固定于固體物質(zhì)上的成分；另一是流動相，即可以流動的物質(zhì)，如水和各種溶媒。當待分離的混合物隨溶媒（流動相）通過固定相時，由于各組份的理化性質(zhì)存在差異，與兩相發(fā)生相互作用（吸附、溶解、結(jié)合等）的能力不同，在兩相中的分配（含量對比）不同，而且隨溶媒向前移動，各組份不斷地在兩相中進行再分配。與固定相相互作用力越弱的組份，隨流動相移動時受到的阻滯作用小，向前移動的速度快。反之，與固定相相互作用越強的組份，向前移動速度越慢。分部收集流出液，可得到樣品中所含的各單一組份，從而達到將各組份分離的目的。

（二）層析法分類見表16-5～7

（三）層析法的特點與應(yīng)用

表16-5　按兩相所處狀態(tài)分類

		流動相
		液體	氣體
	液體	液-液層析法	氣-液層析法
固定相
	固體	液-固層析法	氣-固層析法

層析法是根據(jù)物質(zhì)的理化性質(zhì)不同而建立的分離分析方法。根據(jù)層析峰的位置及峰高或峰面積，可以定性及定量。層析法與光學、電學或電化學儀器連用，可檢測出層析后各組份的濃度或質(zhì)量，同時繪出層析圖。層析儀與電子計算機聯(lián)用，可使操作及數(shù)據(jù)處理自動化，大大縮短分析時間。由于層析法具有分辨率高、靈敏度高、選擇性好、速度快等特點，因此適用于雜質(zhì)多、含量少的復(fù)雜樣品分析，尤其適用于生物樣品的分離分析。近年來，已成為生物化學及分子生物學常用的分析方法。在醫(yī)藥衛(wèi)生、環(huán)境化學、高分子材料、石油化工等方面也得到了廣泛的應(yīng)用。

表16-6　按層析原理分類

名稱	分離原理
吸附層析法	組份在吸附劑表面吸附固定相是固體吸附劑，各能力不同
分配層析法	各組份在流動相和靜止液相（固相）中的分配系數(shù)不同
離子交換層析法	固定相是離子交換劑，各組份與離子交換劑親和力不同
凝膠層析法	固定相是多孔凝膠，各組份的分子大小不同，因而在凝膠上受阻滯的程度不同
親和層析法	固定相只能與一種待分離組份專一結(jié)合，以此和無親和力的其它組份分離

表16-7　按操作形式不同分類

名稱	操作形式
柱層析法	固定相裝于柱內(nèi)，使樣品沿著一個向前移而達分離
薄層層析法	將適當粘度的固定相均勻涂鋪在薄板上，點樣后用流動相展開，使各組份分離
紙層析法	用濾紙作液體的載體，點樣后用流動相展開，使各組份分離
薄膜層析法	將適當?shù)母叻肿佑袡C吸附劑制成薄膜，以類似紙層析方法進行物質(zhì)的分離