臨床生物化學(xué)/核酸一級結(jié)構(gòu)（核苷酸序列sequence）分析
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核酸一級結(jié)構(gòu)分析是基因分析最直接的第一手資料。目前DNA、RNA以及蛋白質(zhì)的一級結(jié)構(gòu)分析中，DNA的堿基序列分析方法多樣、簡單、快速。下面就M13噬菌體-雙脫氧核苷酸（ddNTP）的DNA測序法介紹如下。
M13是單鏈DNA噬菌體，轉(zhuǎn)染宿主菌體復(fù)制為雙鏈增殖，又以單鏈形式透出菌體。把待測DNA重組插入雙鏈M13復(fù)制型DNA中，經(jīng)培養(yǎng)擴(kuò)增，可分離得到單鏈M13DNA（含待測單鏈DNA的堿基序列），即復(fù)制模板。在待測DNA的3′端人工合成引物，在DNA聚合酶Ⅰ作用下，復(fù)制鏈延長。在ddNTP（2′,3′雙脫氧核糖核苷三磷酸）存在下，復(fù)制延長隨機(jī)受阻，形成分子量（長度）大小不等的片段。電泳分離，自顯影，讀圖18-9分析堿基序列。
圖18-9 核酸堿基序列分析
0.2-0.3mm厚度聚丙烯酰胺-尿素凝膠，高壓（1600V）電泳，可分辨一個(gè)核苷酸的差異。電泳后干燥凝膠，自顯影，自下往上讀圖，得到5′→3′的合成鏈堿基序列，其互補(bǔ)鏈?zhǔn)谴郎yDNA的3′→5′堿基序列。
 核酸限制性片段長度多態(tài)性（RFLP）分析 | 診斷分子生物學(xué)技術(shù)的臨床應(yīng)用  |
出自A+醫(yī)學(xué)百科 “臨床生物化學(xué)/核酸一級結(jié)構(gòu)（核苷酸序列sequence）分析”條目 http://m.microbiomewatersummit.com/w/%E4%B8%B4%E5%BA%8A%E7%94%9F%E7%89%A9%E5%8C%96%E5%AD%A6/%E6%A0%B8%E9%85%B8%E4%B8%80%E7%BA%A7%E7%BB%93%E6%9E%84%EF%BC%88%E6%A0%B8%E8%8B%B7%E9%85%B8%E5%BA%8F%E5%88%97sequence%EF%BC%89%E5%88%86%E6%9E%90 轉(zhuǎn)載請保留此鏈接
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