缺口平移

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nick translation法,標(biāo)記DNA探針.

缺口翻譯法或切口平移法是實(shí)驗(yàn)室最常用的一種脫氧核糖核酸探針標(biāo)記法。利用E.coli DNA多聚酶I的多種酶促活性將標(biāo)記的dNTP摻入到新合成的DNA鏈中從而形成高比活性的均勻標(biāo)記的DNA探針。線狀、超螺旋及帶缺口的環(huán)狀雙鏈DNA均可作為缺口平移法的模版。

基本原理：

以限量的DNase I在待標(biāo)記的雙鏈DNA的每一條鏈上產(chǎn)生若干個(gè)單鏈缺口；再利用E.coli DNA多聚酶Ⅰ的 5’-3’外切酶活性和5’-3’多聚酶活性，在缺口處的5’末端每切除一個(gè)核苷酸，則在3’末端添加一個(gè)核苷酸，以修補(bǔ)缺口，隨著缺口在DNA鏈上的移動(dòng)，標(biāo)記的核苷酸就摻入到新合成的DNA鏈中。

此法特點(diǎn)是快速、簡(jiǎn)便、標(biāo)記的探針均勻、特異性高；適用于較長(zhǎng)的雙鏈DNA；DNA多聚酶必須是E.Coli DNA多聚酶的全酶；DNA酶Ⅰ的濃度一定要適宜。

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