臨床生物化學(xué)/細(xì)胞調(diào)節(jié)因子實驗室檢測的簡介

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臨床生物化學(xué)

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研究細(xì)胞因子在各種病理生理情況下的活動、分泌以及在治療中使用細(xì)胞因子制劑的效應(yīng),都要求能有效地檢測體內(nèi)細(xì)胞因子的含量(濃度水平),以及檢測細(xì)胞因子的功能(生物效應(yīng))。

從前以細(xì)胞因子的生物學(xué)特征作為其含量分析的基礎(chǔ),免疫分析及其它免疫化學(xué)或生物化學(xué)技術(shù)亦可用于此細(xì)胞因子的測定和部分鑒定,表2-14總結(jié)了已用于細(xì)胞因子功能測定和濃度(含量)測定的方法。

表2-14 細(xì)胞因子分析

生物分析 酶聯(lián)免疫附分析(ELISA)
動物分析 其它
增殖分析 受體結(jié)合分析
骨髓集落形成分析 免疫化學(xué)程序
細(xì)胞毒性細(xì)胞穩(wěn)定性分析 細(xì)胞或細(xì)胞中的測定
抗病毒分析 勻漿生物分析或免疫分析
次級分子分泌的誘導(dǎo) 免疫組化或免疫細(xì)胞分析
趨化作用化學(xué)促進作用分析 流式細(xì)胞計數(shù)
細(xì)胞因子分泌活性的抑制 酶聯(lián)免疫印跡(ELISPOT)
免疫分析 反相溶血斑分析
放射免疫分析(RIA) 細(xì)胞因子mRNA原位雜交
免疫放射光譜分析(IRMA)

人細(xì)胞因子實驗測定的標(biāo)準(zhǔn)化:人細(xì)胞因子的實驗測定中仍存在諸多問題,選擇分析方法不恰當(dāng)則可能導(dǎo)致混亂甚至錯誤的結(jié)論。有時有必要同時選擇幾種方法分析某些細(xì)胞因子。生物分析方法特異性差,那些使用細(xì)胞株的生物分析可能與不同細(xì)胞因子反應(yīng),而且可受非細(xì)胞因子分子的影響。用于維持細(xì)胞生物的細(xì)胞因子能強烈地影響某些依賴細(xì)胞對一些細(xì)胞因子的反應(yīng)程度。有的細(xì)胞在連續(xù)傳代后可能失去對某些細(xì)胞因子的反應(yīng)性,此外,由于抑制劑如受體拮抗劑、可溶性細(xì)胞因子受體或其他拮抗劑分子的存在,測得細(xì)胞因子活性結(jié)果可能會比實際活性偏低。

由于蛋白酶的存在或與抑制劑如可溶性受體形成復(fù)合物,免疫分析能測得失去生物活性或具部分生物活性的細(xì)胞因子分子,并可受到基質(zhì)效應(yīng)的影響。此外,特異性問題影響了細(xì)胞因子mRNA測定,而mRNA水平亦不一定與具生物活性的細(xì)胞因子水平相一致。其它影響自動免疫分析方法準(zhǔn)確性的問題還包括抗體的選擇、分析的不均勻、分子糖基化的不同、寡聚體的形成及循環(huán)受體的影響,雖然免疫分析的結(jié)果并不一定反映細(xì)胞因子的生物活性,但一般而言,免疫分析及其它配體結(jié)合分析都更容易標(biāo)準(zhǔn)化。

目前,英國已能提供下列細(xì)胞因子的標(biāo)準(zhǔn)化參考試劑:IL-1α,IL-1β,IL-2-9,GM-SCF,M-CSF,TGF-α,TGF-β,TGF-γ,SCF,LIF(白血病抑制因子),IFN-α1,IFN-α2b,IFNγ,還能供應(yīng)IFN-α2a,IFN-β及IFN-γ的國際標(biāo)準(zhǔn)。但于細(xì)胞因子分子的不均勻,其分析的標(biāo)準(zhǔn)化仍是問題。因此,要求各實驗室的細(xì)胞因子分析應(yīng)參考國際標(biāo)準(zhǔn)。某些細(xì)胞因子具有易被破壞的特性,從而要求非常細(xì)致和標(biāo)準(zhǔn)化的取樣。

隨著細(xì)胞因子在治療上的不斷應(yīng)用,其測定方法亦得到了廣泛的發(fā)展,臨床檢師必須選用正常的分析方法支持臨床醫(yī)生,為臨床診斷提供相對簡易的實驗程序和準(zhǔn)確的操作技術(shù)。

32 細(xì)胞調(diào)節(jié)因子 | 糖代謝紊亂 32
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